endecnplse

HotRox Master Mix 2x

Numer kat.Wielkość opakowaniaCena netto,PLN
119550

HotRox Master Mix 2x (Final ROX conc. 500 nM;  100 rxn) (2x1,25ml)

227,50
119505

HotRox Master Mix 2x (Final ROX conc. 50 nM;

100 rxn) (2x1,25ml)

217,00

Research use only

arkusz danych: HotRox Master Mix 2x

Opis:
2 x HotRox Master Mix jest zoptymalizowaną, gotową do użycia mieszaniną Polimerazy Taq DNA , przeciwciał dla  polimerazy Taq DNA , Bufor do PCR , MgCl2 oraz dNTP. 2x PCR Master Mix zawiera wszystkie komponenty niezbędne do PCR za wyjątkiem matryc oraz starterów. Mix sprawdza się w przypadku Real Time PCR.

Kompozycja 2x HotRox Master Mix :

  • Polimeraza Taq DNA (rekombinant) w buforze reakcyjnym: 0.1 unit/µl 
  • Przeciwciała dla Polimerazy Taq DNA , Stężenie odpowiednie do efektywnej inhibicji  aktywności polimerazy DNA w  37oC     
  • 32 mM (NH4)2SO4
  • 130 mM TrisHCl, pH 8.8 at 25oC  
  • 0.02% Tween-20  
  • 3 mM MgCl2  
  • dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP): 0.4 mM każdego

Urządzenie

Końcowe stężenie ROX .

ABI 7000, 7300, 7700, 7900HT

500 nM

ABI 7500, Stratagene Mx3005P, Mx4000

50nM

Wielkość opakowania:

2x 1,25 ml - Wystarczające dla 100 reakcji HotStart PCR o bjętości reakcyjnej 50 µl .

Działanie i testy czystości:
Testowany na obecność endodeoksyrybonukleaz oraz egzodeoksyrybonukleaz. 2x HotRox Master Mix był przetestowany podczas amplifikacji pojedynczych kopii genów, genomowego DNA myszy. 

Próba na endodeoxyrybonukleazy :
 Po inkubacji 25 µl   dU-HOT Master Mix z 1 µg plazmidu  pUC19 DNA w 50 µl przez 4 godziny  w temperaturze 37°C oraz 70oC, nie zaobserwowano konwersji kolistego DNA do formy liniowej DNA.

Zastosowanie: 
- PCR
- Wydłużanie starterów 
- Multiplex PCR
- Low-copy targets PCR  
- Real-time PCR  

Powiązane aktywności: 
Po dwugodzinnej inkubacji mixu z 0,22 mg EcoRI trawiącego Lambdę DNA w temperaturze 72°C w obecności 15-20 jednostek enzymu zawartego w Master mixie  SUPERHOTSTART, nie zaobserwowano aktywności endo- oraz egzonukleazy.

Warunki przechowywania:
Przechowywać HotRox Master MIX zamrożony w -20°C , chronić przed światłem. 

Protokół dla PCR z udziałem SuperHot PCR Master Mix

W związku z inhibicją aktywności polimerazy w temperaturze pokojowej przez przeciwciała polimerazy AntiTaq DNA, wszystkie reakcje mogą być rozpoczęte w tempertaurze pokojowej. Nie będzie to miało wpływu na wzrost tworzenia się niespecyficznych produktów czy też dimerów starterów.

Dodać do cienkościennej probówki:  

50 µl objętość reakcyjna25 µl objętość reakcyjna
składnikobjętośćkońcowe stężenieobjętośćkońcowe stężenie
2x PCR Master Mix25 µl1x12.5 µl1x
Forward Primerzmienne0.1-1 µlzmienne0.1-1 µl
Reverse Primerzmienne0.1-1 µlzmienne0.1-1 µl
matryca DNAzmienne10 pg-1µgzmienne10 pg-1 µg
Sterylna dejonizowana wodado 50 µl-do 25 µl-
  • Delikatnie wymieszać próbkę i krótko odwiruj tak, aby zebrać wszystkie krople znajdujące się na spodzie próbówki .
  • próbkę przykryć warstwą oleju mineralnego lub dodać odpowiednią ilość wosku, jeśli termocykler nie posiada ogrzewanej pokrywy
  • Umieścić próbkę w termocyklerze i rozpocząć optymalny program dla PCR   
to topprint