SuperHot Master Mix
OPINIA KLIENTA (producent kitów diagnostycznych): "PCR Master Mix daje doskonałe wyniki w detekcji <em>Mycoplasma</em>. Został wybrany spośród 15 enzymów produkowanych przez dobrze znanych na rynku międzynarodowym dostawców. Wykazuje 100% specyficzność i bardzo wysoką wrażliwość".
| Nr katalogowy | Opakowanie | Cena netto, EUR | SKLEP |
| 119102 | 100 reakcji (2x1,25ml) 3,0 mM MgCl2 | 65,00 | dodaj do wózka |
| 119110 | 500 reakcji (10x1,25ml) 3,0 mM MgCl2 | 320,00 | dodaj do wózka |
| 119104 | 100 reakcji (2x1,25ml) 7,0 mM MgCl2 | 65,00 | dodaj do wózka |
| 119108 | 500 reakcji (10x1,25ml) 7,0 mM MgCl2 | 320,00 | dodaj do wózka |
Informacja: Master Mixy są skalkulowane na objętość reakcyjną wynoszącą 50 µl . Korzyść: Jeśli pracujecie z objętością reakcyjną wynoszącą 25 µl możecie wykonać 200 testów.
Tylko do celów naukowo-badawczych.
Datasheet: SuperHot Master Mix
Arkusz danych: Super Hot Mastermix
Zastosowanie*:
- PCR
- Reakcje wydłużania starterów
- Multiplex PCR
- PCR na niskopijnym DNA matrycowym
- Real-time PCR
Charakterystyka: 2x SuperHot PCR Master Mix jest zoptymalizowaną, gotową do użycia mieszaniną Polimerazy Taq DNA, przeciwciał dla polimerazy Taq DNA, buforu, MgCl2 oraz dNTP. 2x PCR Master Mix zawiera wszystkie składniki do reakcji PCR, za wyjątkiem matrycy DNA oraz starterów. Mix jest doskonały do real time PCR.
2x SuperHot PCR Master Mix:
- Taq DNA Polimeraza w buforze reakcyjnym: 0.1 unit/µl
- Przeciwciała dla polimerazy Taq DNA, stężenie dostosowane do efektywnej inhibicji aktywności DNA polimerazy w temp. 37oC
- 32 mM (NH4)2SO4
- 130 mM TrisHCl, pH 8.8, 25oC
- 0.02% Tween-20
- 3 mM MgCl2
- dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP): 0.4 mM każdego
Wielkość opakowania:
2x 1,25 ml - wystarczające na 100 reakcji HotStart PCR w objętości 50 µl
10x 1,25 ml - wystarczające na 500 reakcji HotStart PCR w objętości 50 µl
Działanie i testy czystości:
Przetestownay na obecność endodeoksyrybonukleaz oraz egzodeoksyrybonukleaz. 2x SuperHot PCR Master Mix przetestowano również w amplifikacji pojedynczych kopii genów mysiego, genomowego DNA.
Próba na endodeoksyrybonukleazy :
Po inkubacji 25 µl 2x SuperHot PCR Master Mix z 1 µg plazmidu pUC19 DNA w 50 µl przez 4 godziny w temperaturze 37°C oraz 70oC, nie zaobserwowano konwersji kolistego DNA do formy liniowej DNA.
Powiązane aktywności:
Po dwugodzinnej inkubacji mieszaniny z 0,22 mg DNA Lambda strawionego EcoRI w temperaturze 72°C w obecności 15-20 jednostek enzymu zawartego w Mastermixie SUPERHOTSTART, nie zaobserwowano aktywności endo- oraz egzonukleazy.
Warunki przechowywania:
-20°C
* Tylko do celów naukowych
Protokół do PCR z użyciem SuperHot PCR Master Mix
W związku z inhibicją aktywności polimerazy w temperaturze pokojowej przez przeciwciała polimerazy AntiTaq DNA, wszystkie reakcje mogą być rozpoczęte w temperaturze pokojowej. Nie będzie to miało wpływu na tworzenie się niespecyficznych produktów czy też dimerów starterów.
Do cienkościennych probówek dodać:
| 50 µl objętość reakcyjna | 25 µl objętość reakcyjna | |||
| Składnik | Objętość | Końcowe stężenie | Objętość | Końcowe stężenie |
| 2x PCR Master Mix | 25 µl | 1x | 12.5 µl | 1x |
| Forward starter | zmienne | 0.1-1 µl | zmienne | 0.1-1 µl |
| Reverse starter | zmienne | 0.1-1 µl | zmienne | 0.1-1 µl |
| Matryca DNA | zmienne | 10 pg-1µg | zmienne | 10 pg-1 µg |
| Sterylna woda dejonizowana | do 50 µl | - | do 25 µl | - |
- Delikatnie zworteksować próbkę i krótko ją zwirować, aby zebrać wszystkie krople znajdujące sie na spodzie próbówki
- Na próbkę nałożyć warstwę oleju mineralnego lub dodać odpowiednią ilość wosku, jeśli termocykler nie posiada ogrzewanej pokrywy
- Umieścić próbkę w termocyklerze i rozpocząć optymalny program PCR.
