SuperHOT Mastermix
OPINIA KLIENTA: (producent kitów diagnostycznych): "PCR Master Mix daje doskonałe wyniki w detekcji Mycoplasma DNA .Był wybrany spośród 15 produktów ,dobrze znanych na rynku, dostaców enzymwów. Wykazuje 100% specyficzność i bardzo wysoką wrazliwość".
| Numer kat. | Wilekość opakowania | Cena netto,PLN |
| 119102 | 100 reactions (2x1,25ml) | 221,00 |
| 119110 | 500 reactions (10x1,25ml) | 1088,00 |
Arkusz danych: Super Hot Mastermix
Zastosowanie*:
- PCR
- Wydłużanie starterów
- Multipleks PCR
- Low-copy targets PCR
- Real-time PCR
Opis: 2 x SuperHot PCR Master Mix jest zoptymalizowaną , gotową-do-użycia miksturą Polimerazy Taq DNA , przeciwciał dla polimerazy Taq DNA, buforu, MgCl2 oraz dNTP. 2x PCR Master Mix zawiera wszystkie składniki dla PCR, za wyjątkiem matryc DNA oraz starterów. Mix jest również efektywny w przypadku real time PCR.
Skład 2x SuperHot PCR Master Mix :
Taq DNA Polymerase in reaction buffer: 0.1 unit/µl
- Przeciwciała dla polimerazy Taq DNA, stężenie dostosowane do efektywnej inhibicji aktywności DNA polimerazy w temp. 37oC
- 32 mM (NH4)2SO4
- 130 mM TrisHCl, pH 8.8 at 25oC
- 0.02% Tween-20
- 3 mM MgCl2
- dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP): 0.4 mM of each
Wielkość opakowania:
2x 1,25 ml - wystrczające dla 100 HotStart PCR reakcji w 50 µl objetości reakcyjnej
10x 1,25 ml - wystarczające dla 500 HotStart PCR reakcji w 50 µl objętości reakcyjnej
Działanie i testy czystości:
Przetestownay na obecność endodeoxyrybonukleaz oraz exodeoxyrybonukleaz. 2x SuperHot PCR Master Mix przetestowano również w amplifikacji pojedynczych kopii genów, mysiego genomowego DNA.
Próba na endodeoxyrybonukleazy :
Po inkubacji 25 µl 2x SuperHot PCR Master Mix z 1 µg plazmidu pUC19 DNA w 50 µl przez 4 godziny w temperaturze 37°C oraz 70oC, nie zaobserwowano konwersji kolistego DNA do formy liniowej DNA.
Powiązane aktywności:
Po dwugodzinnej inkubacji mixu z 0,22 mg EcoRI trawiącego Lambdę DNA w temperaturze 72°C w obecności 15-20 jednostek enzymu zawartego w Master mixie SUPERHOTSTART, nie zaobserwowano aktywności endo- oraz egzonukleazy.
Warunki przechowywania:
"SUPERHOTSTART" Master MIX przechowywac zamrozony w -20°C
* Research use only
Protokół dla PCR z użyciem SuperHot PCR Master Mix
W związku z inhibicją aktywności polimerazy w temperaturze pokojowej przez przeciwciała polimerazy AntiTaq DNA, wszystkie reakcje mogą być rozpoczęte w tempertaurze pokojowej. Nie będzie to miało wpływu na wzrost tworzenia się niespecyficznych produktów czy też dimerów starterów.
Dodać do cienkościennych probówek PCR:
| 50 µl objętość reakcyjna | 25 µl objętość reakcyjna | |||
| Składnik | objętość | końcowe stęż.. | objętość | końcowe stęż. |
| 2x PCR Master Mix | 25 µl | 1x | 12.5 µl | 1x |
| Forward starter | zmienne | 0.1-1 µl | zmienne | 0.1-1 µl |
| Reverse starter | zmienne | 0.1-1 µl | zmienne | 0.1-1 µl |
| Matryca DNA | zmienne | 10 pg-1µg | zmienne | 10 pg-1 µg |
| sterylna dejonizowana woda | up to 50 µl | - | up to 25 µl | - |
- Delikatnie wymieszać próbkę i krótko odwiruj tak, aby zebrać wszystkie krople znajdujace sie na spodzie próbówki .
- próbkę przykryć warstwą oleju mineralnego lub dodać dpowiednią ilość wosku, jeśli termocykler nie posiada ogrzewanej pokrywy
- Umieścić próbkę w termocyklerze i rozpocząć optymalny program dla PCR.
