Poliemraza klein Taq DNA
| Numer kat. | Wielość opakowania | Cena netto, PLN |
| 118002 | 200 u | 206,50 |
| 118010 | 1000 u | 871,50 |
Arkusz danych: Klein Taq DNA Polymerase
Deutsches Datenblatt: Klein Taq DNA Polymerase
Opis:
KleinTaq jest pochodną polimerazy Taq DNA . Jest to polimeraza Taq DNA skrócona na końcu 5'-egzo-N-terminalnym. Uzyskana dzięki ekspresji genu w konstrukcie w E.coli, rozpoczyna translację od Met236, omijając domenę 5'-3' egzonukleazy, polimerazy DNA.
Enzym wykazuje wysoką aktywność, a odporność na wysoką temperaturę jest nawet wyższa niż w przypadku Polimerazy Taq DNA. Optymalny zakres stężenia jonów Mg2+ dla KleinTaq jest szerszy niż w przypadku większości termostabilnych polimeraz. Ta cecha pozwala na łatwiejszą optymalizację warunków reakcji niż w przyapadku innych polimeraz. Ponowna ekspozycja enzymu w 98 oraz 99°C nie zmniejsza jego aktywności.
Stężenie:
5-10000 units/ml
Definicja jednostki:
Jedna jednostka jest definiowana jako ilość enzymu , który włącza 10 nmoles dNTP do nierozpuszczalnego kwasu w ciagu 30 min w 72°C.
Bufor do przechowywania:
10 mM K-phosphate pH 7,0, 100 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,01% Tween 20, 50% glicerol
Przechowywanie:
-20oC
Bufor reakcyjny10x incomplete:
160 mM (NH4)2SO4; 670 mM Tris-HCl pH (ph 8,8) ; 0,1% Tween-20
Bufor reakcyjny 10x complete:
160 mM (NH4)2SO4; 670 mM Tris-HCl pH (ph 8,8) ; 0,1% Tween-20, 25 mM MgCl2
Bufor reakcyjny 10x complete II KCl:
500 mM KCl; 100 mM Tris-HCl pH (ph 8,8) ; 0,1% Tween-20, 15 mM MgCl2
Plus jedna probówka MgCl2 (100mM)
Kontrola jakości:
Aktywność, SDS-PAGE -czystość, obecność endonukleaz/ nickases and egzonukleaz
Protokół Klein Taq dla amplifikacji ~ 2000 bp
dla objętości 50 µl :
| matryca DNA | 10 - 15 ng plazmid DNA | |
| Starter | 0.1 - 1 µM końcowe stężenie | |
| dNTPs | 0.2 mM each (końcowe stężenie ) | |
| KleinTaq | 2-12 units in 50 µl | |
| 10 x Bufor reakcyjny Bioron complete (z MgCl2) | 5 µl | MgCl2 ostatecznie 2.5 mM |
| Dodać H2O nie więcej niż 50 µl |
Termocykl:
Liczba termocykli będzie zależała od ilości matrycy DNA. W większości przypadków 25 cykli jest wystrczające . Dla małej ilości kopii genów lub dla rzadko występującego DNA , zalecane 30-35 cykli. Parametry amplifikacji będa się rózniły w zależności od starterów, wielkości amplikonów i używanego termocyklera. Może wystąpić konieczność zoptymalizowania systemu. Dla amplikonów o wielkości 5-10 kb, należy zwiększyć czas do 6-10 minut.
Dla przykładu: Termocykler 480 (Perkin-Elmer-Cetus); Wielkość amplikonu 500 - 2000 bp, matryca 10 ng plazmidu DNA .
Reakcja następuje po 25 cyklach:
94°C 30 - 45 s
58 - 61°C 30 s
72°C 100 s
