2 x dU-Hot Master Mix
| Nr katalogowy | Opakowanie | Cena netto, EUR | SKLEP |
| 119202 | 100 rcs (2x1,25ml) | 65,00 | dodaj do wózka |
| 119210 | 500 rcs (10x1,25ml) | 320,00 | dodaj do wózka |
Informacja: Master Mixy są przeliczane na objętość reakcyjną wynoszącą 50 µl. Korzyść: pracując na objętości 25 µl można przeprowadzić 200 testów.
Arkusz danych: 2 x dU-Hot Master Mix
Charakterystyka:
2x dU-Hot Master Mix jest zoptymalizowaną, gotową do użycia mieszaniną Taq DNA polimerazy i przeciwciał dla Taq DNA polimerazy, buforu PCR, MgCl2 oraz dNTP. dUTP w mieszaninie zapewnia ochronę przed carry-over próbek zawierających UDG (kat#111025). 2x 
PCR Master Mix zawiera wszystkie składniki niezbędne do przeprowadzenia reakcji PCR, z wyjątkiem matrycy DNA i priemrów. Mix może być z powodzeniem stosowany do Real Time PCR.
2 x dU-Hot Master Mix - skład
- Taq DNA Polimeraza w buforze reakcyjnym: 0.1 units/µl
- Przeciwciała dla Taq DNA polimerazy, stężenie zostało dopasowane do efektywnej inhibicji aktywności polimerazy w temperatyrze 37°C
- 32 mM (NH4)2SO4
- 130 mM TrisHCl, pH 8.8, 25oC
- 0,02% Tween-20
- 3 mM MgCl2
- dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP): 0.4 mM każdego
- dUTP - 0,6 mM
Opakowanie:
2x 1,25 ml - wystarczające na 100 reakcji HotStart PCR w objętości 50 µl
10x 1,2 5ml - wystarczające na 500 reakcji HotStart PCR w objętości 50 µl
Do enzymu dodatkwo dostarczana jest jedna probówka MgCl2 (100 mM)
Działanie i testy na czystość:
Mix został przetestowany na obecność endodeoksyrybonukleaz oraz egzodeoksyrybonukleaz. 2x dU-HOT Mastermix został przetestowany w reakcji amplifikacji pojedynczego genu z genomu myszy.
Próba na endodeoksyrybonukleazy:
Nie zaobserwowano konwersji kolistej formy DNA do liniowej formy po inkubacji 25 µl 2x dU-HOT Mastermix z 1 µg DNA plazmidu pUC19 w mieszaninie o objętości 50 µl przez 4 godziny zarówno w temperaturze 37°C jak i 70oC.
Protokół PCR z dU-Hot Master Mix PCR Master Mix
Ze względu na fakt inhibicji aktywności polimerazy przez przeciwciała, wszystkie reakcje mogą być nastawiane w temperaturze pokojowej, nie będzie to skutkowało powstawaniem niespecyficznych produktów lub dimerów starterów.
Do cienkościennych probówek dodać:
50 µl objętość reakcyjna | 25 µl objętość reakcyjna | |||
| Składnik | Objętość | Końcowe stężenie | Objętość | Końcowe stężenie |
| 2x PCR Master Mix | 25 µl | 1x | 12.5 µl | 1x |
| Forward Primer | zmiennie | 0.1-1 µl | zmiennie | 0.1-1 µl |
| Reverse Primer | zmiennie | 0.1-1 µl | zmiennie | 0.1-1 µl |
| Matryca DNA | zmiennie | 10 pg-1µg | zmiennie | 10 pg-1 µg |
| Sterylna woda dejonizowana | do 50 µl | - | do 25 µl | - |
- Delikatnie zworteksować próbkę i krótko zwirować, aby zebrać wszystkie krople znajdujące się na dnie próbki
- Na próbkę nałożyć warstwę oleju mineralnego lub odpowiednią ilość wosku, jeżeli termocykler nie posiada ogrzewanej pokrywy
- Umieścić próbkę w termocyklerze i rozpocząć optymalny program PCR.
