DFS-Taq Mastermix (2X)

Informacja: Mastermixy są przeliczane na objętość reakcyjną wynoszącą 50 µl. Korzyść: pracując na objętości 25 µl można przeprowadzić 200 testów.

Arkusz danych: DFS-Gen-Taq Master Mix (A)
Charakterystyka:
2x PCR Master Mix to zoptymalizowana, gotowa do użycia mieszanina Taq DNA polimerazy, buforu do PCR, MgCl₂ i dNTP. 2x PCR Master Mix zawiera wszystkie komponenty reakcji PCR, za wyjątkiem matrycy DNA i starterów. Mix zawiera DFS-Taq DNA Polimerazę - polimerazę bez śladu DNA <em>E.coli</em>, ale ze zwiększoną zdolnością do detekcji niskokopijnych genów (Bioron, kat# 101005, 101025, 101100, 101500). Ze względu na obecność DFS-Taq DNA polimerazy, mix może być stosowany nie tylko do wszystkich standardowych reakcji PCR, ale również do matryc zawierających sekwencje DNA <em>E.coli</em>.
2x PCR Master Mix - skład:
Taq DNA Polimeraza (rekombinant) w buforze reakcyjnym: 0.1 units/ µl
32 mM (NH₄)₂SO₄
130 mM Tris-HCl, pH 8.8, 25^oC
0,02% Tween-20
5,5 mM MgCl₂
dNTP (dATP, dCTP, dGTP, dTTP): 0.4 mM każdego
Działanie i testy na czystość:
Mix był testowany na obecność endo- i egzodeoksyrybonukleaz. Jego działanie sprawdzono na pojedynczych kopiach genów ludzkich oraz mysich.
Próba na endodeoksyrybonukleazy:
Nie wykryto konwersji kolistej formy DNA do formy liniowej po inkubacji 25 µl 2x PCR Master Mix z 1 µg DNA pUC19 w mieszaninie o objętości 50 µl przez 4 godziny zarówno w temperaturze 37°C jak i 70^oC.
Warunki przechowywania:
MasterMix powinien być przechowywany w temperaturze -20^oC. Powtarzane (do 10 razy) zamrażanie i rozmrażanie nie powoduje redukcji wydajności w reakcji PCR, przechowywanie w temperaturze +4^oC przez 1 tydzień również nie skutkuje obniżeniem wydajności w działaniu.
Protokół: Zalecane jest nastawianie wszystkich reakcji na lodzie w celu uniknięcia powstawania niespecyficznych produktów lub dimerów primerów.

Do cienkościennych probówek dodać:
                                50 µl objętość reakcyjna 50 µl objętość reakcyjna
składnik objętość końcowe stężenie objętość końcowe stężenie
2x PCR Master mix 25 µl 1x 12.5 µl 1x
MgCl₂ zmiennie zmiennie zmiennie zmiennie
forward primer zmiennie 0.1 - 1 µl zmiennie 0.1 - 1 µl
reverase primer zmiennie 0.1 - 1 µl zmiennie 0.1 - 1 µl
matryca DNA zmiennie 10 pg - 1µg zmiennie 10 pg-1µg
sterylna woda dejonizowana do 50 µl       - do 25 µl         -
•    Delikatnie zworteksować próbkę i lekko zwirować, aby umieścić wszystkie krople na dnie
•    Nałożyć olej mineralny lub dodać odpowiednią ilość wosku, jeżeli termocykler nie posiada pokrywy ogrzewanej
•    Umieścić próbki w termocyklerze i rozpocząć standardowy program PCR.
Jeżeli MgCl₂ nie zostało dodane do mieszaniny reakcyjnej, końcowe stężęnie MgCl₂ w mieszaninie będzie wynosiło 2,75 mM. Dodanie 1 µl 100 mM MgCl₂ do mieszaniny reakcyjnej da stężenie 4,75 mM MgCl₂ w objetości końcowej 50 µl.

SNPase

Lyophilized Taq DNA