Ligaza DNA T4
| Numer kat. | Wielkość opakowania | Cena netto,EUR |
| 402002 | 2000 u | 4,80 |
| 402010 | 10000 u | 19,20 |
Arkusz danych : T4 DNA Ligase
Deutsches Datenblatt: T4 DNA Ligase
Opis:
Ligaza DNA T4 katalizuje tworzenie wiązania fosfodiestrowego pomiędzy końcem 5' fosforanowym,a 3' hydroksylowym w dupleksie DNA/RNA. Enzym ten może łączyć zarówno końce lepkie jaki i tępe, ma równiez zdolności naprawcze w stosunku do pojedynczych nici dupleksów DNA, RNA, lub hybryd DNA/RNA .
Stężenie:
50000 - 100000 units/ml.
Źródło:
Oczyszczony ze szcepu E. coli niosącego plazmid który kieruje syntezą ligazy DNA T4 .
Zastosowanie:
Konowanie fragmentów restrykcyjnych, Przyłączanie linkerów oraz adaptorów do tepych końców DNA,synteza genów(fragmentów genów).
Ligacja DNA o końcach lepkich:
W wiekszości przypadków 30 minutowa inkubacja w 20°C, jest wystarczająca do przeprowadzenia ligacji lepkich końców. W wiekszości przyapdków stosuje sie inkubacje 4-16 godzinną w 16°C.
Ligacja tępych końców oraz fragmentów DNA zakończonych pojedynczą parą zasad ,wymaga większej ilości enzymu, aby osiagnąć ten sam stopień ligacji jak w przypadku końców lepkich.Ligacja może byc wzmocniona poprzez dodatek PEG lub przez zmniejszenie stężenia rATP.
ATP jest niezbednym kofaktorem podczas reakcji.
Bufor do przechowywania:
50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50% glycerol.
Definicja jednostki:
1jednostka jest zdefiniowana jako ilość enzymu niezbędna do przeprowadzenia 50% ligacji fragmentów lambdy DNA strawuinego Hind III w ciągu 30 minutu w temperaturze 16°C przy stężeniu konców 5' wynoszącym 0,12 µM (300 µg/ml). One Cohesive End Ligation Unit equals 0.015 Weiss units. One Weiss unit equals 67 Cohesive End Ligation Units.
Bufor reakcyjny(x1):
50 mM Tris HCL (pH 7,8), 10mM MgCl2, 10mM DTT, 1 mM ATP.
Zapewnienie jakości:
Kazda ilośc ligazy DNA t$ jest testowana na obecność endonuckleaz/egzonukleaz, in a Blue/White cloning assay.
Warunki przechowywania:
-20oC.
