PCR-ready-Reagent (DNA-Purification from blood-samples)
System oczyszczania DNA PCR-ready daje prostą, efaktywną i niedrogą metodę izolowania DNA z krwi, do dalszych analiz. Technika jest oparta na termokoagulacji białek, polisacharydów i innych biomolekuł, w specyficznych warunkach.
| Numer kat. | Wielkoścć opakowania | Cena netto ,PLN |
| 805060 | 50 preps | 346,50 |
| 805120 | 100 preps | 626,50 |
Protkół:
1. Zebrać 2 ml krwi ustabilizowanej EDTA lub cytrynianem. Unikać stosowania heparyny jako środka antykoagulującego!!
2. Zużyć próbkę krwi w ciągu 2 godzin od pobrania, bez schładzania. Nie przechowywać próbek w temperaturze
4 – 8 °C dłużej niż 24 godziny.
3. Przed oczyszcaniem, wymieszać próbkę, w celu usunięcia tworzących sie warstw. Przenieść 1 ml
krwi do 1,5 ml zamykanej probówki.
4. Zamknąć probówkę i wirować z prędkością 3000 rpmp przez 5 minut w temp. pkojowej.
Krew zostanie rozdzielona na 3 warstwy(Na dnie znajdą się czerwone krwinki, następnie warstwa leukocytów i osocze)
5. Ostrożnie usunąć pipetą osocze tak, aby nie uszkodzić warstwy leukocytów. Nie podjemować prób, całkowitego usunięcia
osocza, w takim przypadku naruszenie warstwy leukocytów będzie nieuniknione
6. Zamknąć probówkę i inkubować przez 1 godzinę w –20ºС (w zamrażarce) .
7. Rozmrozic całkowicie zawartość probówki w temperaturze pokojowej.
8. Zmierzyć (w przybliżeniu) objętość zawartości probówki(zazwyczaj jest to 550 mikrolitrów).
Dodać jednakową objetość PCR-ready-Reagent do probówki.Zamknąć probówkę.
9. Dobrze wymieszać na vorteksie przez 10 sekund.
10. Umieścić próbke we wcześniej ogrzanym do 98ºC termostacie, inkubować 15 minut.
11. Umieścic probówkę w wirówce z zakiem skierowanym do osi rotora.
Probówkę odwirować z predkością 8000-14000 rpm przez 20-30 sek. w temp. pkojowej.
12. Do reakcji PCR użyć supernatantu. Jako zasadę, przyjmuje się, że 5 mikrolitrów supernatantu wystarcza do
przeprowadzenia pomyślnie reakcji PCR .
Supernatant może być przeniesiony do nowej probówki i przechowywany do 6 miesięcy w temperaturze -20°C.
Ważne informacje.
1. Nie używać próbek krwi satbilizowanej heparyną jako środek antykoagulacyjny !
2. Nie uzywać skoagulowanej krwi do oczyszczania DNA .
3. Unikać uszkodzenia warstwy leukocytów w punkcie 5. Ten etap jest bardzo ważny, poniewaz usunięcie osocza wraz z leukocytami
da całkowice niepomyślny wynik.
4. Do termokoagulacji w punkcie 10 zawsze używaj probówek z wieczkiem safety-lock!
