Kit do oczyszczania DNA One Tube
| Nr katalogowy | Opakowanie | Cena netto, EUR | SKLEP |
| 805050 | 50 preps | 104,00 | dodaj do wózka |
| 805100 | 100 preps | 199,00 | dodaj do wózka |
| 806050 (do qPCR) | 50 preps | 104,00 | dodaj do wózka |
| 806100 (do qPCR) | 100 preps | 209,00 | dodaj do wózka |
Charakterystyka: System do oczyszczania DNA One Tube zapewnia szybkie, proste i efektywne podejście do izolacji genomowego DNA z szerokiej gamy biopróbek, takich jak: nabłonek cewki moczowej, szyjki macicy, pochwy, nabłonek jamy ustnej, sperma, płyn z gruczołu krokowego, mocz, ślina, flegma, płyn maziówkowy, etc. Do reakcji qPCR i Real Time PCR dostępny jest również OTP-reagent bez barwnika.
Metoda oparta jest na termokoagulacji białek, polisacharydów i innych biomolekuł w ściśle określonych warunkach. Całkowity proces oczyszczania zajmuje mniej niż godzinę. Uzyskane w ten sposób DNA może być z powodzeniem stosowane w reakcjach PCR i może być przechowywane w +2-8°C przez jeden tydzień lub do 6 miesięcy w temperaturze -20°C.
System do oczyszczania DNA One Tube można łatwo transportować - posiada pożywkę do biopróbek.
Warunki przechowywania: OTP-reagent powinien być przechowywany w +2-8°C przez 1 rok. Może być także transportowany i przechowywany w temperaturze pokojowej (do 25°C) nie dłużej niż 5 dni.
Protokół do przygotowania próbek
1. Gromadzenie próbek.
Ważne: Ilość komorek (jeśli są widoczne) nie powinna przekraczać ok. 3 mm na diametr.
A. Należy przenieść komórki nabłonkowe z cewki moczowej, szyjki macicy, pochwy czy nabłonka jamy ustnej przy pomocy jednorazowego, sterylnego wacika do probówki z OTP-reagentem. Następnie należy usunąć wacik z probówki i ją zamknąć. Przed pobraniem próbek należy usunąć nadmiar śluzu z szyjki macicy.
B. Pellet z moczu.
1. Mocz należy pobrać wczesnym rankiem.
2. Po pobraniu należy go dostarczyć do laboratorium w ciagu 1 - 3 godzin.
3. Mocz nie może być schłodzony ani zamrożony, nie może być przechowywany dłużej niż kilka godzin.
4. Należy zamieszać mocz, pobrać 10 - 15 ml do probówek i wirować przez 10 - 15 minut z prędkością 3000 rpm w temperaturze pokojowej.
5. Należy zebrać ostrożnie supernatant, nie naruszając pelletu.
6. Następnie należy przenieść 0,5 ml pelletu do 1,5 ml probówek.
7. Zwirować przez 15 sekund z prędkością 12000 rpm w temperaturze pokojowej.
8. Należy delikatnie usunąć supernatant.
9. (Opcjonalnie: można jednokrotnie przemyć pellet 1 ml roztworu soli fizjologicznej).
10. Dodać całkowitą objętość OTP-reagentu do pelletu w 1,5 ml probówce, dobrze wymieszać przez pipetowanie, a następnie przenieść zawiesinę z powrotem do oryginalnej probówki OTP-reagent.
C. Sperma, płyn z gruczołu krokowego, ślina, flegma, płyn maziówkowy. 20 mikrolitrów próbki należy przenieść do probówki z OTP-reagentem.
Oczyszczanie DNA do PCR
1. Należy ostrożnie zamknąć probówkę OTP-reagent z biopróbką i ją sprawdzić.
2. Dobrze zworteksować próbki z mieszaniną.
3. Umieścić próbki w suchym termostacie nagrzanym do temperatury +98°C.
4. Inkubować przez 15 minut.
5. Następnie należy pozostawić próbki do schłodzenia w temperaturze pokojowej na 1 -2 minuty.
6. Należy zwirować probówki z prędkością 12000 rpm przez 15 sekund.
7. Należy użyć supernatantu jako matrycy w późniejszej reakcji PCR, w zależności od protokołu.
Zauważ: Jeżeli reakcja PCR jest hamowana przez zanieczyszczenia znajdujące się w próbce, należy przenieść 100 µl supernatantu do nowej probówki zawierającej 200 µl OTP-reagentu i powtórzyć kroki 1 -3.
Supernatant może być przechowywany w temperaturze +2-8°C przez jeden tydzień lub do 6 miesięcy w temperaturze -20°C.
<em>Ważne uwagi.
1. Nie należy używać media transportowego z OTP-reagentu do próbek - składniki pożywki transportowej mogą wywoływać inhibicję reakcji PCR!</em><em>
2. Należy, w miarę możliwości, unikać przeniesiena śluzu, krwi, ropy lub innych skażonych materiałów do probówki z OTP-reagentem.</em><em>
3. Należy unikać, w miarę możliwości, narkozy. Niektóre leki mogą wywoływać inhibicję reakcji PCR.</em><em>
4. Nie należy nadmiernie przeciążać probówek komórkami nabłonkowymi! Liczba komórek nabłonkowych (jeśli są widoczne) nie powinna przekraczać ok. 3mm na diametr. W niektórych przypadkach, jeżeli nadmiar materiału jest duży, należy dodatkowo dodać 200 mikrolitrów OTP-reagentu do próbki.</em><em> </em>
