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T4 DNA Ligase

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Opens internal link in current windowDatasheet: T4 DNA Ligase

Opens internal link in current windowDeutsches Datenblatt: T4 DNA Ligase

Beschreibung:
T4 DNA Ligase katalysiert die Bildung von Phosphodiesterbindungen zwischen 5' Phosphat and 3' Hydroxyenden in Doppelstrang DNA/RNA. Das Enzym kann sowohl glatte (blunt-end), als auch kohesive DNA-Enden in duplex DNA/RNA verbinden. Es repariert Einzelstrangbrüche in DuplexDNA, RNA und DNA/RNA Hybriden.

Konzentration:
50000 - 100000 units/ml.

Lagerpuffer:
50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50% Glyzerin

Ligation von kohesiven Enden:
Im Allgemeinen reicht eine 30 minütige Inkubation bei 20°C aus. Inkubationsbedingungen von 16°C für 4-16 Stunden werden eingesetzt. Die Ligation von glatten Enden oder von Einzelbasenüberhängen benötigt wesentlich mehr Enzym um dieselbe Effektivität wie die Ligation von kohesiven Enden zu erreichen. Die Ligationseffizienz kann durch Zusatz von PEG oder durch Reduktion der rATP-Konzentration erhöht werden. ATP ist ein absolut essentieller Cofaktor in der Reaktion.

Reaktionspuffer(x1):
50 mM Tris HCL (pH 7,8), 10mM MgCl2, 10mM DTT, 1 mM ATP.

Qualität::
- Frei von endo- und exonukleasen
- getesetet in blau/weiß Kolonien

Lagerung:
-20oC.   

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