DNA Polymerase I, Klenow Fragment
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Deutsches Datenblatt: Klenow Fragment
Beschreibung Das große (Klenow)-Fragment ist ein proteolytisches Produkt der E. coli DNA-Polymerase I. Die 5´-3' Polymerase- und die 3'-5´Exonukleaseaktivität blieben erhalten, jedoch fehlt die 5´-3' Exonukleaseaktivität. Das Klenow Fragment hat die Synthesegenauigkeit des Holoenzyms behalten ohne 5´-Enden abzubauen.
Anwendungen
· DNA Sequenzierung nach der Sanger-Dideoxy- Methode
· Auffüllen von 5´- Überhängen zu Blunt Ends
· Entfernung von 3´- Überhängen zu Blunt Ends
· Zweitstrang cDNA Synthese
· Mutagenese von DNA mit synthetischen Oligonukleotiden
Herkunft Rekombinantes Enzym aus einem E.coli Stamm mit einem Plasmid, welches für das Klenow Fragment kodiert
Reaktionspuffer (10x) 100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM MgCl2, 50 mM Dithiothreitol. Das Klenow Fragment ist auch in Reaktionspuffern für Restriktionsenzyme sowie für die T4 DNA Ligase aktiv, wenn dNTPs zugegeben sind.
Qualitätskontrolle Getestet auf Abwesenheit von Endonukleasen und 5´-3' Exonukleaseaktivität.
Einheitendefinition Eine Einheit ist definiert als die Menge Enzym, die benötigt wird, um 10 nmol dNTPs innerhalb von 30 Minuten bei 37°C in eine säureunlösliche Form zu überführen.
Konzentration 5.000 – 20.000 Einheiten/ml.
Lagerung bei -20°C
