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HotRox Master Mix 2x - Empfindlichkeit und Spezifität bei der qPCR

Katalog-Nr:

MengePreis, EuroSHOP
119550

HotRox Master Mix 2x (finale ROX Konz.

500 nM;  100 Reaktionen) (2x1,25ml)

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119505

HotRox Master Mix 2x (finale ROX Konz.

50 nM; 100 Reaktionen) (2x1,25ml)

72,00Add to cart

Datasheet: HotRox Master Mix 2x                                                 Nur für den Einsatz im R&D Bereich

Der 2X qPCR HotRox Mastermix ist eine fertige Mischung (Ready-to-Use) aus Taq DNA Polymerase (inhibiert von monoklonaren Antikörpern), dNTPs, MgCl2 und Reaktionspuffer bei optimalen Konzentrationen für die effiziente Amplifikation von DNA Templates mittels qPCR. Der Mastermix enthält den Referenzfarbstoff ROX und ist daher für Geräte geignet die diese Option haben. (ABI 7000, 7300, 7500, 7700, 7900HT, Stratagene Mx3000, MX3005P, Mx4000).

Sie geben nur noch die Primer und die Template DNA dazu.  Der 2X qPCR-HotROX-Mastermix ist speziell für die Verwendung in der Routine PCR bis 4 kb Amplikonlänge entwickelt. Die spezielle Zusammensetzung des Puffers garantiert reproduzierbare Ergebnisse selbst nach wiederholten Auftau- und Einfrierzyklen.

Anwendungsgebiete: 

  • "schwierige" PCR-Templates bei der andere Polymerasen ungenügende Ergebnisse liefern

  • Primer Extension 

  • Multiplex PCR

  • "Low-copy" Targets PCR

  • Real-time PCR  


Beschreibung:

der HotRox Mastermix ist speziell für den Einsatz in der Real Time PCR entwickelt.

 

  • Taq DNA Polymerase (rekombinant): 0.1 unit/µl 
  • Antikörper zu Taq DNA Polymerase, optimiert für eine effektive Inhibierung der Taq DNA Polymerase bei Raumtemperatur
  • 32 mM (NH4)2SO4
  • 130 mM TrisHCl, pH 8.8 at 25oC  
  • 0.02% Tween-20  
  • 3 mM MgCl2  (zur Optimierung liefern wir separat eine Stocklösung vom 100 mM MgCl2)
  • dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP): jeweils 0.4 mM 
  • ROX Farbstoff (abhängig vom jeweiligen Cyclertyp)

Performance- und Qualitätstests:
Frei von Endo- und Exodesoxyribunuklease. Getestet in der Amplifikation eines "Single-copy" Gens genomischer Maus DNA.

Endodeoxyribonukleasetest: Nach der Inkubation von 25µl von 2X SuperHot Mastermix mit zirkulärer DNA wurde keine Umwandlung von kovalenter zu "geschnittener" DNA festgestellt. Der Test wurde mit 1 µg von pUC19 DNA in 50µl für 4 Stunden bei 37°C und 70°C durchgeführt.

Nach der zweistündigen Inkubation von Lambda DNA, versetzt mit 0,22 mg von EcoR I, bei 72°C mit 18 units des Mastermixes wurden keine endo- und exonuklase Aktivitäten festgestellt.

Lagerung:  -20°C

Protokoll:
Durch den inhibierenden Antikörper können alle Schritte bei Raumtemperatur durchgeführt werden

50 µl Reaktions Volumen25 µl Reaktions Volumen
KomponentVolumenEndkonzentrationVolumenEndkonzentration
2x PCR Master Mix25 µl1x12.5 µl1x
Forward Primervariabel0.1-1 µlvariabel0.1-1 µl
Reverse Primervariabel0.1-1 µlvariabel0.1-1 µl
Template DNAvariabel10 pg-1µgvariabel10 pg-1 µg
deionisiertes Wasserbis 50 µl-bis 25 µl-

  • vollständig mischen und zentrifugieren
  • den fertigen Mastemix mit Mineralöl oder Wachs "bedecken" wenn kein Cycler mit "heated lid" verwendet wird
  • Durchführung der PCR
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