Klein Taq DNA-Polymerase der "Ironman" unter den Polymerasen
| Katalog-Nr.: | Menge | Preis, Euro | SHOP |
| 118002 | 200 u | 75,00 | Add to cart |
| 118010 | 1000 u | 299,00 | Add to cart |
Datasheet: Klein Taq DNA Polymerase
Deutsches Datenblatt: Klein Taq DNA Polymerase
Beschreibung: Die Klein-Taq DNA Polymerase ist ein durch Verkürzung am N-Terminus modifiziertes Derivvat der normalen Taq-DNAPolymerase. das resultierende Enzym weist keine Exo-oder Endonukleaseaktivität auf, zeigt aber eine höhere Prozessivität wie normale Taq-DNA-Polymerase und ist erheblich hitzestabiler. Die Aktivität der Klein-Taq DNA Polymerase nimmt erst bei einer Temperatur von 99°C ab. Das Enzym toleriert ein weites Spektrum an Magnesiumkonzentrationen was die Optimierung der PCR erheblich erleichtert
Anwendungsbereiche:
- PCR bei höheren Temperaturen (GC-reiche Sequenzen)
- Spezifische Mutationsanalysen
- Multiplex-PCRs
- Amplifikaton langer Fragemente (in Kombination mit der Pfu sind Amplifikationen >20 kb möglich.
Konzentration:
5-10000 units/ml
Einheitendefinition: Ein Unit ist die Enzymmenge, die bei 72°C in 30 min 10 nmol Desoxyribonukleotide in TCA-fällbares, säureunlösliches Material umwandelt.
Lagerpuffer:
10 mM K-phosphate pH 7,0, 100 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,01% Tween 20, 50% Glyzerin
Storage: -20oC
Reaktionspuffer 10x incomplete:
160 mM (NH4)2SO4; 670 mM Tris-HCl pH (ph 8,8) ; 0,1% Tween-20
Reaktionspuffer 10x complete:
160 mM (NH4)2SO4; 670 mM Tris-HCl pH (ph 8,8) ; 0,1% Tween-20, 25 mM MgCl2
Reaktionspuffer10x complete II KCl:
500 mM KCl; 100 mM Tris-HCl pH (ph 8,8) ; 0,1% Tween-20, 15 mM MgCl2
MgCl2 (100mM) extra
Qualitätskontrolle: getestet auf spezifische Aktivität in PCR-Amplifikation, auf Verunreinigungen im SDS-PAGE. Die Klein-Taq DNA Polymerase ist garantiert frei von Endonucleasen/ Nickasen und Exonucleases
Klein Taq Protokoll für die Amplifikation von ca. 2000 bp Länge
für 50µl Reaktionsvolumen:
| DNA Template | 10 - 15 ng Plasmid DNA | |
| Primer | 0.1 - 1 µM Endkonzentration | |
| dNTPs | 0.2 mM each Endkonzentration | |
| KleinTaq | 2-12 units in 50 µl | |
| 10 x Bioron Reaktionspuffer complete (mit MgCl2) | 5 µl | Endkonzentration MgCl2 ist 2.5 mM |
| Mit Wasser auf 50 µl auffüllen |
PCR Reaktion:
Die Anzahl der Zyklen ist abhängig von der Ausgangsmenge der Template DNA. In den meisten Fällen sind 25 Zyklen ausreichend. Für "low copy number genes" oder seltene DNAs empfehlen wir eine Anzahl von 30-35 Zyklen. Die Parameter für die Amplifikation varieren aufgrund der Primer, der Fragmentgröße und des PCR-Cyclers den Sie benutzen. Es ist daher notwendig die PCR für Ihr System zu optimieren. Für die Amplification von Fragmenten von 5-10 kb sollte die Extensionszeit um 6-10 min verlängert werden.
Hier ein Beispiel: Thermal Cycler 480 (Perkin-Elmer-Cetus); Amplikongröße
500-2000 bp, 10 ng Plasmid DNA .
PCR-Cycler Programm mit 25 Cylen:
94°C 30 - 45 sek
58 - 61°C 30 sek
72°C 100 sek
