DNA-Schnellaufreinigung aus Blut mit PCR-ready Reagent
PCR-ready-Reagent (DNA-Aufreinigung aus Blutproben)
Das PCR-ready DNA Aufreinigunssystem bietet eine einfache, effektive, sichere und günstige Möglichkeit zur DNA-Isolierung aus Vollblut für die anschließende PCR-Analyse. Die Technik basiert auf der Thermokoagulation von Proteinen, Polysacchariden und anderen Biomolekülen unter definierten Bedingungen.
Einfach - Effektiv -Sicher- Günstig
| Katalog-Nr.: | Menge | Preis, Euro | Shop |
| 805060 | 50 preps | 109,00 | Add to cart |
| 805120 | 100 preps | 199,00 | Add to cart |
Protokoll:
1. Verwenden Sie 2 ml Vollblut stabilisiert mit EDTA oder Citrat. Vermeiden Sie den
Einsatz von Heparin als Antikoagulant für Ihre Blutproben.
2. Das Blut sollte spätestens innerhalb von 2 Stunden nach der Entnahme
aufgearbeitet werden. Bei einer Lagerung der Probe bei 4-8 °C sollte eine
Lagerzeit von 24 Stunden bis zur DNA-Isolierung nicht überschritten werden.
3. Falls sich bereits Schichten gebildet haben mischen Sie die Probe vor Beginn der
Aufreinigung und überführen Sie 1 ml der Blutprobe in ein 1,5 ml Reaktionsgefäß
mit einem Sicherheitsverschluss
4. Schließen Sie das Reaktionsgefäß und Zentrifugieren Sie die Probe bei 3000 rpm
für 5 min bei Raumtemperatur. Das Blut wird in drei sichtbare Schichten
aufgetrennt (unten die roten Blutzellen, darüber das Plasma und dazwischen ein
dünner Film mit den Leukozyten).
5. Entfernen Sie das Plasma vorsichtig mit einer Pipette ohne die dünne
Leukozytenschicht zu beschädigen. Versuchen Sie dabei nicht das Plasma
vollständig zu entfernen da die Gefahr besteht die Leukozyten mit zu
entfernen.
6. Schließen Sie das Reaktionsgefäß und inkubieren Sie 1 Stunde bei -20°C.
7. Tauen Sie die Probe vollständig bei Raumtemperatur auf.
8. Schätzen Sie grob das Volumen des Inhalts (normalerweise 550 µl). Geben Sie
dasselbe Volumen an PCR-ready-Reagent dazu und schließen Sie das
Reaktionsgefäß wieder.
9. Vortexen Sie die Mischung für 10 Sekunden.
10. Stellen Sie die Probe in einen Thermoblock bei 98°C für 15 min.
11. Setzen Sie das Reaktionsgefäß so in den Rotor der Zentrifunge ein, dass der
Verschluss zur Achse des Rotors zeigt, und zentrifugieren Sie bei 8000-14000 rpm
für 20-30 Sekunden bei Raumtemperatur.
12. Der Überstand kann direkt in die PCR-Reaktion eingesetzt werden In der Regel sind
5 µl vom Überstand ausreichend um gute PCR-Ergebnisse zu erzielen.
Der Überstand kann in ein neues Reaktionsgefäß überführt werden und bei einer
Lagertemperatur von -20°C bis zu 6 Monate gelagert werden.
Wichtige Anmerkungen:
1. Verwenden Sie für die DNA-Aufreinigung keine Blutproben, die mit Heparin als
Antikoagulant versetzt sind!
2. Verwenden Sie für die DNA-Aufreinigung kein koaguliertes Blut.
3. Vermeiden Sie eine Verletzung der Leukozytenschicht in Schritt 5. Dieser Schritt ist
sehr wichtig da eine Entfernung des Plasmaüberstandes zusammen mit der
Leukozytenschicht dazu führt, dass sie keine oder nur eine geringe Ausbeute an
gereinigter DNA erhalten.
4. Für die Themokoagulation in Schritt 10 sollten Sie unbedingt nur Reaktionsgefäße
mit einem Sicherheitsverschluss verwenden!
