One Tube DNA Aufreinigung (OTP-Reagent)
schnell-effektiv-sicher-günstig
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| 805050 | 50 preps | 109,00 | Add to cart |
| 805100 | 100 preps | 199,00 | Add to cart |
| 806050 (for qPCR) | 50 pres | 119,00 | Add to cart |
| 806150 (for qPCR) | 100 preps | 199,00 | Add to cart |
Beschreibung:
Das One Tube DNA-Aufreinigungssystem bietet eine einfache, schnelle und effektive Möglichkeit zur Isolierung genomischer DNA aus einer Vielzahl an biologischen Proben (Abstrichmaterial von Zervix, Vagina und Mundschleimhaut, Sperma, Prostataflüssigkeit, Urin-Präziptitat, Speichel, Schleim, Gelenkflüssigkeit und anderen Flüssigbiopsien). Für qPCR und Real-time Anwendungen ist das OTP-Reagent auch ohne Farbstoff erhältlich.
Die Technik basiert auf der Thermokoagulation von Proteinen, Polysacchariden und anderen Biomolekülen unter definierten Bedingungen. Der Aufreinigungsprozess dauert weniger als eine halbe Stunde. Die DNA kann anschließend direkt in die PCR eingesetzt werden. Für eine Kurzzeitlagerung (weniger als eine Woche) ist eine Lagertemperatur von +2-8°C ausreichend, bei -20°C ist die Probe bis zu 6 Monaten haltbar.
-Einfach clever-
Das OTP-Reagent ist ein DNA-Aufreinigunssystem und zugleich Lager-und Transportmedium für Bio-Proben.
Lagerbedingungen: Das OTP-Reagent ist bei einer Lagertemperatur von +2-8°C 1 Jahr haltbar und kann bei Raumtemperatur (25°C) transportiert werden. Die Lagerzeit bei Raumtemperatur sollte allerdings 5 Tage nicht überschreiten.
Protokolle zur Probenvorbereitung
1. Sammeln des Probenmaterials
Wichtig: Die Menge an Zellen (falls sichtbar) sollten nicht mehr als eine Fläche von 3mm Durchmesser einnehmen.
A. Epitheliales Abstrichmaterial: wird direkt mit dem Wattestäbchen bzw. Bürste in das OTP-Reagent durch kurzes Eintauchen überführt. Entfernen Sie das Wattestäbchen bzw. Bürste wieder aus dem Reaktionsgefäß mit OTP-Reagent und schließen Sie das Reaktionsgefäß. Vermeiden Sie einen Überschuss an Vaginalschleim bei der Entnahme der Cervixproben.
B. Urin-Prezipitat
1. Zur Untersuchung sollte Morgen-Urin gesammelt werden.
2. Die Urinprobe sollte nicht älter als 3 Stunden sein.
3. Der Urin darf nicht gekühlt oder eingefroren werden.
4. Mischen Sie die Urinprobe und überführen Sie 10-15 ml in ein Zentrifungenröhrchen
und zentrifugieren Sie bei 3000 rpm bei Raumtemperatur für 10-15 min.
5. Verwerfen Sie den Überstand vorsichtig, ohne das Pellet zu zerstören.
6. Überführen Sie 0,5 ml der Pelletsuspension in ein 1,5 ml Reaktionsgefäß.
7. Zentrifugieren Sie bei 12000 rpm für 15 sek bei Raumtemperatur.
8. Entfernen Sie vorsichtig den Überstand.
9. (Optional: waschen Sie das Pellet mit 1ml physiologischer Kochsalzlösung).
10. Geben Sie das gesamte Volumen OTP-Reagent zum Pellet im 1,5 ml
Reaktionsgefäß und mischen Sie sorgfältig durch Auf- und Abpipettieren.
Danach überführen Sie die Suspension zurück in das orginal OTP-Reagent Tube.
C. Bei Sperma-, Prostataflüssigkeit-, Speichel-, Schleim-, Gelenkflüssigkeitproben geben
Sie 20 µl der Probe zum OTP-Reagent.
DNA-Aufreinigung zur PCR-Analyse
1. Schließen Sie das OTP Tube (inkl. Probe) und prüfen Sie ob
der Deckel richtig verschlossen ist.
2. Vortexen Sie das Tube sorgfältig.
3. Stellen Sie die Probe in einen vorgewärmten (< 98°C) Heizblock.
4. Inkubation für 15 min.
5. Abkühlen der Probe auf Raumtemperatur für 1 - 2 min.
6. Zentrifugieren Sie bei 12000 rpm für 15 sek bei Raumtemperatur.
7. Verwenden Sie den Überstand als Template für anschließende PCR-Reaktionen.
Anmerkung: Falls die PCR durch Verunreinigungen in der Probe inhibiert sein sollte, überführen Sie den Überstand in ein neues Tube mit 200 µl OTP Reagent und wiederholten Sie Schritt 1 - 3.
Der Überstand kann bei +2-8°C für eine Woche und bei -20°C für bis zu 6 Wochen gelagert werden.
Wichtige Anmerkungen.
1. Verwenden Sie kein anderes OTP-Reagenz als Transportmedium für Ihre Proben -
Komponenten dieses Transportmediums könnten die PCR Reaktion inhibieren.
2. Vermeiden Sie, dass sich Schleim, Blut, Eiter und anderes kontaminierendes
Material im Tube mit OTP-Reagenz absetzt.
3. Vermeiden Sie, wenn möglich, Nakosemittel in der Probe. Manche Medikamente
bewirken eine Inhibierung der PCR.
4. Das Tube sollte nicht mit Epithelzellen überladen werden. Die Menge an Epithelzellen
sollte nicht mehr als 3 mm im Durchmesser betragen. Im Falle, dass die Menge an
Zellmaterial größer sein sollte, verwenden sie zusätzlich 200 µl OTP-Reagenz.
