Ron's Blood and Cell DNA Mini Kit

Ron’s Blood RNA Kits wurde entwickelt um totale intrazelluläre RNA aus bis zu 1,5 ml frischem Vollblut, das mit jedem herkömmlichen Anticoagulans wie Heparin, EDTA oder Säure-Citrat-Dextrose, zu isolieren. 1 ml Blut enthält in der Regel 1 -5 µg totaler RNA. Die Durchführung entfernt Verunreinigungen und Enzyminhibitoren komplett und sorgt somit für eine schnelle, komfortable und zuverlässige totale RNA Isolation in weniger als 60 min. Phenol/Chloroform Extraktionen gehören, genauso wie zeitaufwendige Schritte wie eine CsCl Gradienten Ultrazentrifugation und Präzipitation mit Isopropanol oder LiCl, der Vergangenheit an.

Durch Ron’s Blood RNA Methode gereinigte RNA kann direkt für weitere Anwendungen wie RT-PCR, Poly(A)+-RNA Extraktionen, Northern Blots, Nuklease Protection Assays und In-vitro Translationen verwendet werden.

Prinzip

Ron’s Blood RNA Kit nutzt die reversibel bindende Eigenschaft der HiBind Matrix, ein neues, auf Silicia basierendes Material. Dies ist mit der Geschwindigkeit von mini-Säulen Spin-Technologie kombiniert. Rote Blutkörperchen werden selektiv lysiert und weiße Blutkörperchen werden durch die Zentrifugation angereichert. Nach der Lyse der weißen Blutkörperchen unter denaturierenden Bedingungen, die RNasen deaktiviert, wird die totale RNA in PerfectBind Spin-Säulen aufgereinigt. Ein speziell entwickeltes Puffersystem mit viel Salz erlaubt es RNA Moleküle mit mehr als 200 Basen an die Matrix zu binden. Zelluläre Ablagerungen und andere Verunreinigungen (wie etwa Hämoglobin) werden effektiv weggewaschen und RNA mit sehr guter Qualität wird schließlich in RNase-freiem Wasser eluiert.

Ron’s Blood RNA Kits wurden speziell für die Isolation von totaler RNA aus maximal 1,5 ml Probenvolumen entwickelt. Die Funktionalität dieses Kits wird  nicht auf die Bindekapazität der PerfectBind RNA Säule begrenzt, sondern durch das maximale Probenvolumen. In Abhängigkeit von der großen Quantität an Erythrozyten und Proteine im Blut, wird die Ausbeute und Qualität der erhaltenen RNA durch große Probenvolumen stark reduziert.

Es ist auch möglich das Kit für RNA Isolation für gefrorene Blutproben anzuwenden, das Volumen der Proben ist jedoch auf 150 µl für jedes Säule begrenzt.