OTP Reagenz (1 Tube DNA Aufreinigung)

Das One Tube DNA Purification System bietet eine einfache, schnelle und effektive Möglichkeit genomische DNA aus einem großem Bereich von Bio-Proben wie etwa Gewebe der Harnröhre, des Muttermundes, der Vagina, bukkalem Epithelium, Sperma, Prostataflüssigkeit, Urinproben, Speichel, Schleim, Synovialflüssigkeit etc. Für qPCR und Real-Time Anwendungen ist das OTP-Reagenz auch ohne Farbstoff erhältlich.

Die Technik basiert auf der Thermocoagulation von Proteinen, Polysacchariden und anderen Biomolekülen unter spezifischen Bedingungen. Der Prozess dauert weniger als eine halbe Stunde. Die daraus resultierende DNA kann effektiv bei PCRs benutzt werden.

Das One-Tube DNA Purification System ist ein cleveres Transport- und Lagerungsmedium für Bio-Proben.

Lagerungsbedingungen

-20 °C

Protokoll für die Vorbereitung der Proben

Entnahme der Bioproben

Wichtig: Die Anzahl der Zellen (wenn erkennbar) sollte nicht mehr als circa 3 mm Durchmesser haben.

• A. Transferieren Sie die Epitheliumzellen der Urethra, der Cervix, der Vagina, des bukkalen Epithelium mit einem sterilen Einwegtupfer in das Tube mit OTP-Reagenz. Entfernen Sie den Tupfer aus dem Tube und schließen Sie es. Entfernen Sie den überschüssigen Schleim der Cervix vor der Probeentnahme.

• B. Urine pellet
  1. Der Urin sollte in den frühen Morgenstunden gesammelt werden
  2. innerhalb von 1-3 Stunden nach der Sammlung ins Labor bringen
  3. Urin kann nicht gekühlt oder tiefgefroren werden, er kann nicht länger als wenige Stunden gelagert werden.
  4. Mischen Sie den Urin, füllen Sie 10 – 15 ml davon in ein Zentrifugenröhrchen und zentrifugieren Sie 10 – 15 min bei Raumtemperatur und 3000 rpm.
  5. Nehmen Sie den Überstand vorsichtig ab, berühren Sie das Pellet nicht
  6. Transferieren Sie 0,5 ml der Pellet-Suspension in ein 1,5 ml Tube
  7. Zentrifugieren Sie bei 12000 rpm für 15 sek bei Raumtemperatur
  8. Nehmen Sie den Überstand vorsichtig ab
  9. (Optional: Waschen Sie das Pellet einmal mit 1 ml Kochsalzlösung)
  10. Füllen Sie das Volumen in dem 1,5 ml Tube mit dem Pellet mit OPT-Reagenz auf, mischen Sie durch hoch und runter pipettieren gut durch und transferieren Sie die Suspension zurück in das originale OTP-Reagenztube

• C. Sperma, Prostataflüssigkeit, Speichel, Schleim und Synovialflüssigkeit. Transferieren Sie 20 µl der Probe in das Tube mit dem OTP-Reagenz.

DNA Reinigung für PCR Analyse

1. Schließen und überprüfen Sie die OTP-Tubes mit den Bio-Proben vorsichtig.
2. Vortexen Sie die Tubes mit der Mixtur gut
3. Platzieren Sie die Tubes in einen auf 98 °C vorgewärmten trockenen Heizer
4. inkubieren Sie für 15 min
5. Lassen Sie es 1 – 2 Minuten bei Raumtemperatur abkühlen.
6. Zentrifugieren Sie die Tubes bei 12000 rpm für 15 Sek
7. Benutzen Sie den Überstand als Template für die anschließende PCR, abhängig von ihrem Protokoll.

Bitte beachten: Wenn die PCR durch Verunreinigungen inhibiert wird, transferieren Sie 100 µl des Überstandes in ein neues Tube mit 200 µl des OTP-Reagens und wiederholen Sie die Schritte 1 – 3.

Wichtiger Hinweis

1. Benutzen Sie für die Proben kein anderes Transportmedium als das OTP-Reagenz– die Komponenten des Transportmediums könnten sonst die PCR Reaktion inhibieren.
2. Versuchen Sie die Überführung von Schleim, Blut, Eiter und anderen kontaminierendem Meaterial in das Tube mit OTP-Reagenz zu vermeiden
3. Versuchen Sie Anästhesien wenn möglich zu vermeiden. Manche Medikamente könnten die PCR inhibieren.
4. Überladen Sie das Tube nicht mit zu viel Epitheliumzellen! Die Anzahl der Zellen (wenn erkennbar) sollte nicht mehr als circa 3 mm Durchmesser haben. In manchen Fällen kann zu einer zu große Menge an Material zusätzliche 200 Microliter OTP-Reagenz in die Probe gegeben werden.